PCR -Tests (Polymerase -Kettenreaktion) sind eine Kerntechnologie in der molekularen Diagnostik. Die Standardisierung seiner Verpackungs- und Testprozesse wirkt sich direkt auf die Genauigkeit und Biossicherheit der Ergebnisse aus. Dieser Artikel bietet eine professionelle Perspektive auf die wichtigsten Qualitätskontrollpunkte im gesamten PCR -Testprozess.
Die Probenbeleg und Vorbehandlung sind die ersten Schritte im Prozess. Laboratorien müssen die Probenidentifikation, die Transportbedingungen und die Speicherzeit streng überprüfen, um die Integrität der Stichproben zu gewährleisten. Nach Erhalt müssen die Proben nummeriert und in einem Kabinett der BiOSeFety registriert sein und sich vor - Verarbeitungsverfahren wie Lyse und Nukleinsäureextraktion basierend auf dem Testtyp unterziehen. In dieser Phase ist ein zwei - -Personenüberprüfungssystem erforderlich, um die Verschmutzung von Cross - zu verhindern.
Die Präparation des PCR -Reaktionssystems muss innerhalb einer sauberen Bank durchgeführt werden. Die Bediener müssen die Schutzausrüstung der Stufe 3 tragen und Nuclease - freie Verbrauchsmaterialien verwenden. Die Reagenzierungspräparation hält sich an das Prinzip "unidirektionaler Workflow", wechselt vom Reagenziervorbereitungsbereich zum Probenverarbeitungsbereich und dann zum Verstärkungsbereich. Negative Kontrollen, Positivkontrollen und interne Kontrollen müssen in jeder Reaktionsanhänger einbezogen werden, um die experimentelle Validität zu überwachen.
Während der Verstärkungs- und Testphase muss das PCR -Instrument vor - kalibrierte und Temperaturzyklussparameter überprüft werden. Das Reaktionsverfahren enthält typischerweise drei Schritte: Denaturierung (94 - 95 Grad), Annealing (50-65 Grad) und Erweiterung (72 Grad). Die Anzahl der Zyklen wird basierend auf dem Erkennungsziel eingestellt. Die Echtzeit-Fluoreszenz-PCR erfordert auch die Überwachung des Fluoreszenzsignalschwellenwerts bestimmter Kanäle.
Die Ergebnisanalyse und -berichterstattung muss von qualifizierten Technikern durchgeführt werden. Rohdaten müssen von mindestens zwei Fachleuten überprüft werden, um die Morphologie der Amplifikationskurve, die Plausibilität des CT -Werts und die Einhaltung der Qualitätskontrollmaterialien mit den Standards zu bestätigen. Der Abschlussbericht sollte Informationen zur Testmethodik, die Grundlage für die Ergebnisinterpretation und eine Erklärung der Testbeschränkungen enthalten.
Der gesamte Prozess hält streng an ISO 15189 und relevante CDC -Spezifikationen. Ein dreifaches Garantiesystem der Umweltüberwachung, der Wartung von Geräten und der Personalschulung wird durchgeführt, um die Zuverlässigkeit und Rückverfolgbarkeit von PCR -Tests zu gewährleisten.